革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法,1884年由丹麦医师、细菌学家汉斯·克里斯蒂安·约阿希姆·革兰氏(HansChristianJoachimGram,1853-1938)创立。革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤。
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤。结果:革兰氏阳性菌呈蓝紫色,革兰氏阴性菌呈红色。革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在化学组成和生理性质上有很多差别,染色反应不一样。
一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤,具体操作 *** 是:1)涂片固定。2)草酸铵结晶紫染1分钟。3)自来水冲洗。4)加碘液覆盖涂面染约1分钟。5)水洗,用吸水纸吸去水分。
革兰氏染色:(1)涂片:涂片 *** 与简单染色涂片相同。(2)晾干:与简单染色法相同。(3)固定,与简单染色法相同。(4)结晶紫色染色:将玻片置于废液缸玻片搁架上,加适量(以盖满细菌涂面)的结晶紫染色液染色1分钟。
加一滴碘液,染色1分钟,水洗。08 吸残留水,加95%乙醇脱色半分钟,流出液体无紫色后,立即水洗。09 加蕃红染色四分钟,水洗。 革兰氏染色完成,观察即可。10 革兰氏阳性菌为蓝紫色,阴性菌为红色。
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤,具体操作 *** 是:涂片固定。草酸铵结晶紫染1分钟。蒸馏水冲洗。加碘液覆盖涂面染约1分钟。水洗,用吸水纸吸去水分。
步骤:初染(结晶紫→水洗→媒染(路革氏碘液)→水洗→脱色(95%酒精)→复染(潘红)→水洗→干燥、镜检 原理:细菌的不同显色反应是由于细胞壁对乙醇的通透性和抗脱色能力的差异,主要是肽聚糖层厚度和结构决定的。
最主要的环节是酒精脱色。还有其它环节:制片时菌膜的厚度和细菌量是否太多、脱色时间是否适宜、稀释石炭酸复红的浓度及是否已有沉淀、加热固定时是否加热过度等。革兰氏染色法原理:G+、G-细菌的细胞壁成分和结构不同。
影响革兰氏染色结果的正确性的环节主要是涂片环节、加热固定环节、脱色环节;其中最关键的环节是脱色环节。被普遍采用的经Hucker氏改良的革兰氏染色法,其操作步骤为:制片→初染→媒染→脱色→复染→干燥→观察。
影响因素 在实验中经常会出现假阳性和假阴性的结果,假阳性主要是由于脱色不完全,可能是由于涂片过厚,或者是结晶紫染色过度,导致脱色不完全。
革兰氏染色成败的关键是酒精脱色.如脱色过度,革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌;如脱色时间过短,革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌.脱色时间的长短还受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影响,难以严格规定。
在同一载玻片上两端,分别对已知的革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌和需要鉴定的未知杆菌进行革兰氏染色;同理,在另一载玻片上两端,分别对已知的革兰氏阴性菌大肠杆菌和需要鉴定的未知杆菌进行革兰氏染色。